抗坏血酸过氧化物酶(APX)是一种重要的抗氧化酶,广泛存在于植物、藻类和部分微生物中。它属于过氧化物酶家族,主要功能是催化抗坏血酸(AsA)与过氧化氢(H₂O₂)的反应,生成单脱氢抗坏血酸(MDHA)和水,从而清除细胞内的活性氧(ROS),保护细胞免受氧化损伤。APX在植物应对逆境胁迫(如干旱、高温、盐害等)过程中发挥关键作用,是植物抗氧化防御系统的重要组成部分。测定APX活性的常用方法是基于酶促反应中抗坏血酸氧化速率的变化。通常采用分光光度法,在290nm波长下监测抗坏血酸消耗引起的吸光度下降。反应体系一般包含抗坏血酸、过氧化氢、酶提取液和缓冲液。APX活性以单位时间内抗坏血酸减少的量表示(如μmolAsAmin⁻¹mg⁻¹protein)。测定时需严格控制pH(通常为7.0左右)和温度(25-30℃),并避免光照干扰,因为抗坏血酸易光解。此外,由于APX对抑制剂(如氰化物、叠氮化物)敏感,提取过程中需加入还原剂(如DTT或抗坏血酸)以维持酶活性。准确测定APX活性对于研究植物氧化应激响应、抗逆机制以及环境胁迫生理具有重要意义。
