细菌人工染色体（BAC）是一种基于大肠杆菌F质粒构建的高容量克隆载体，能够稳定携带100-300kb的外源DNA片段。BAC系统因其低拷贝数、高稳定性和结构简单等优势，广泛应用于基因组文库构建、基因功能研究和转基因动物制备等领域。在BAC分析方面，常用技术包括：1.限制性酶切分析：通过酶切图谱验证插入片段大小和完整性2.末端测序：使用T7/SP6启动子引物进行插入片段末端测序3.荧光原位杂交（FISH）：定位BAC克隆在染色体上的物理位置4.PCR验证：针对特定标记基因设计引物进行扩增验证BAC修饰方法主要包括：1.同源重组：利用Red/ET重组系统进行基因敲除、点突变或报告基因插入2.转座子介导：通过Tn5等转座子随机插入突变3.Gateway克隆：实现BAC载体的快速重组改造4.CRISPR-Cas9编辑：对BAC进行靶向基因修饰这些技术为基因组研究和基因工程提供了重要工具，特别是在大片段DNA操作方面展现出独特优势。
