Westernblot是一种常用的蛋白质检测技术，主要用于分析特定蛋白质在复杂样品中的表达水平、分子量大小以及翻译后修饰情况。其基本原理是通过电泳将蛋白质按分子量大小分离，随后将分离的蛋白质转移到固相膜上（如PVDF或硝酸纤维素膜），再利用特异性抗体与目标蛋白结合，最后通过化学发光或显色等方法检测目标蛋白的存在。操作流程主要包括以下几个步骤：1.**样品制备**：提取细胞或组织中的蛋白质，并进行定量，确保上样量一致。2.**SDS-PAGE电泳**：利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）按分子量大小分离蛋白质。3.**转膜**：将凝胶中的蛋白质转移到固相膜上，便于后续抗体孵育。4.**封闭**：用脱脂奶粉或BSA封闭膜上的非特异性结合位点，减少背景信号。5.**一抗孵育**：加入针对目标蛋白的特异性一抗，使其与目标蛋白结合。6.**二抗孵育**：加入带有标记（如HRP或荧光基团）的二抗，与一抗结合。7.**检测**：通过化学发光、荧光或显色方法检测目标蛋白信号，并进行成像分析。Westernblot广泛应用于分子生物学、医学研究和药物开发等领域，是研究蛋白质表达和功能的重要工具。
