免疫荧光技术是一种结合免疫学与荧光标记技术的高灵敏度检测方法，广泛应用于细胞生物学和病理学研究。其原理基于抗体与目标抗原的特异性结合，通过荧光标记的二抗或直接标记的一抗，在特定波长激发下发出荧光信号，从而实现对目标分子的定位与可视化。操作流程主要分为样本制备、固定与通透、抗体孵育、荧光标记及封片观察等步骤。首先，对细胞或组织样本进行固定（如多聚甲醛）以保持结构，接着通过通透处理（如TritonX-100）增强抗体渗透性。随后，用一抗与目标抗原结合，洗涤后加入荧光标记的二抗（如FITC或Cy3标记），最后通过封片剂（如抗淬灭剂）封片，在荧光显微镜下观察特定波长的荧光信号。该技术具有高特异性与多重标记优势，但需注意抗体选择、非特异性结合控制及荧光淬灭等问题。适用于蛋白质定位、共定位分析及动态过程研究等领域。