CRISPR-Cas9是一种革命性的基因编辑技术，它利用细菌的天然免疫系统来精确修改目标DNA序列。该系统由两部分组成：Cas9蛋白和单链向导RNA（sgRNA）。Cas9蛋白是一种核酸内切酶，能够在特定位置切割DNA双链。sgRNA则负责引导Cas9蛋白到达目标DNA位点，其包含两部分：1.**CRISPRRNA（crRNA）**：与目标DNA互补配对，确保精准定位。2.**trans-activatingcrRNA（tracrRNA）**：与Cas9蛋白结合，形成功能复合体。**sgRNA设计的关键因素**：-**靶序列选择**：通常为20个核苷酸，位于PAM序列（NGG，N代表任意碱基）上游。-**特异性**：需避免脱靶效应，通过生物信息学工具（如BLAST）验证唯一性。-**GC含量**：建议40%-60%，以提高结合效率。-**二级结构**：避免sgRNA自身形成复杂结构，影响Cas9结合。该技术广泛应用于基因功能研究、疾病治疗及农业育种等领域。
