铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）PAO1菌株是一种常见的条件致病菌，其生物被膜形成能力在感染和耐药性中起重要作用。SYTO9/PI荧光探针标记技术为动态观察生物被膜的形成提供了有效手段。SYTO9是一种膜通透性核酸染料，可标记活菌的DNA，发出绿色荧光；而碘化丙啶（PI）是一种膜非通透性染料，只能进入膜受损的死菌，与DNA结合后发出红色荧光。通过这两种染料的组合使用，可以实时区分生物被膜中的活菌和死菌，并定量分析生物被膜的形成过程、结构变化以及菌群活性分布。该技术广泛应用于生物被膜发育动态、抗菌药物效果评估以及环境因素对生物被膜影响的研究中。