Primer-BLAST是NCBI提供的一款在线引物设计和特异性检验工具。它结合了Primer3的引物设计功能和BLAST的序列比对能力,能够帮助研究人员设计出特异性高的引物。主要特点:1.可针对特定模板序列设计引物2.能自动检验引物在选定数据库中的特异性3.提供多种参数设置选项,满足不同实验需求4.支持跨外显子引物设计,适用于cDNA模板5.可视化结果显示引物位置和产物信息使用流程:1.输入目标序列或accessionnumber2.设置引物设计参数3.选择特异性检验数据库4.提交任务并查看结果该工具特别适用于需要确保引物特异性的分子生物学实验,如qPCR、克隆等。通过自动化的BLAST比对,可有效避免非特异性扩增问题。