在真核生物中，mRNA的Poly(A)尾巴是在细胞核内通过多聚腺苷酸化过程加上的。这一过程发生在转录后，由多聚腺苷酸化信号序列（AAUAAA）介导。首先，剪切刺激因子（CPSF）识别并结合AAUAAA序列，随后其他蛋白质如剪切因子I和II（CFI、CFII）以及多聚腺苷酸聚合酶（PAP）被招募到mRNA上。接着，mRNA在AAUAAA下游约10-30个核苷酸处被剪切，PAP随即在3'端逐个添加腺苷酸（A），形成约200-250个腺苷酸组成的Poly(A)尾巴。Poly(A)尾巴对mRNA的稳定性、核输出及翻译效率至关重要。
